INTRODUCCIÓN

Los ovocitos de Xenopus laevis tienen una alta capacidad de síntesis de proteínas y permiten la expresión y caracterización de proteínas de diferentes organismos, en particular, proteínas de plantas.
Tienen un fácil manejo en el laboratorio (1 mm de diametro) y pueden expresar la proteína que quieras inyectándole el mRNA que la codifica.
Este sistema es compatible con estudios de interacción proteína-proteína (BiFC), localización subcelular, ensayos bioquímicos, purificación de la proteína y análisis de la función (por ejemplo, por electrofisiología).
Este servicio ofrece tres prestaciones:

1- Extracción de ovocitos. Se obtendrán ovocitos desfoliculados listos para inyectar el cRNA que codifique la proteína/s de interés. La tarifa se aplica por cada lote de 50 ovocitos obtenidos.

2- Inyección de ovocitos. Se prepararán las muestras de cRNA a partir del DNA que mande el solicitante mediante PCR seguida de transcripción in vitro. Los cRNAs se inyectarán posteriormente de forma individual o combinados (coexpresión de diferentes proteínas en un mismo ovocito). Al cabo de unos días ese cRNA será traducido en proteínas en los ovocitos y se podrán analizar. Existe una gran variedad de aplicaciones posteriores con los ovocitos inyectados (estudio de actividad, interacción proteína-proteína, localización subcelular, estudios bioquímicos en extractos celulares, etc.). La tarifa se aplica por cada lote de 50 ovocitos inyectados con 1 cRNA.

3- Análisis de los ovocitos de Xenopus por fijación de voltaje a dos electrodos (Two-electrode Voltage-clamp). En esta prestación, los ovocitos se analizarán mediante la técnica de fijación de voltaje a dos electrodos. Es necesario que la proteína de interés tenga capacidad de transporte de solutos a ambos lados de la membrana del ovocito (canal o transportador). La tarifa se aplica por cada lote de 50 ovocitos analizados.

Equipos del servicio:

- Cohorte de ranas Xenopus. Aportarán los ovocitos.

- Termociclador de PCR. Este equipo permite amplificar el DNA que se usará para la síntesis de cRNA posteriormente.

- Inyector controlado por microprocesador NANOLITER2010 (World Precision Instruments). Este equipo permite inyectar muestras de cRNA del orden de nanolitros en los ovocitos de Xenopus.

- Amplificador para fijación de voltaje a dos electrodos AXOCLAMP 900A (Molecular Devices) con tarjeta de adquisición de datos DIGIDATA 1550B (Molecular Devices). Este equipo permite fijar el voltaje en la membrana del ovocito y registrar la intensidad de corriente que pasa a través de ésta.

Condiciones del servicio

El Servicio de expresión de proteínas en ovocitos de Xenopus es un Servicio General de Apoyo a la Investigación. En él se preparan y se analizan muestras para los diversos Grupos de Investigación del CEBAS-CSIC y de los distintos Organismos Públicos de toda España, Universidades, etc. El Servicio de expresión de proteínas en ovocitos de Xenopus se ha creado en 2022. Las muestras son recibidas en el Servicio y procesadas en el menor tiempo posible. Se discutirá con los solicitantes las posibilidades que ofrece cada prestación (extracción de ovocitos, inyección de ovocitos e análisis de ovocitos por fijación de voltaje a dos electrodos). Este servicio cuenta con distintos equipos de última gama y con personal con amplia experiencia internacional para realizar las prestaciones ofertadas.

Personal

Manuel Nieves Cordones – Investigador Ramon y Cajal – Ext 445521
mncordones@cebas.csic.es

Tarifas

Tarifas del Servicio de Expresión de Proteínas en Ovocitos de Xenopus 2023
SERVICIO	CEBAS	CENTROS CSIC	OOPP	OTROS
Extracción de ovocitos (lote de 50 ovocitos)	12,66 €	14,84 €	58,99 €	64,56 €
Inyección de cRNA (lote de 50 ovocitos)	199,42 €	233,93 €	419,46 €	459,03 €
Analisis por TEVC (lote de 50 ovocitos)	99,78 €	117,04 €	434,05 €	475 €

CENTRO DE EDAFOLOGÍA Y BIOLOGÍA APLICADA DEL SEGURA-CSIC
Campus Universitario, 25. Espinardo - 30100. Murcia. España